Purificazione di plasmidi ad alto e basso numero di copie

CosMCPrep è una procedura versatile di purificazione di plasmidi basata sulla tecnologia a biglie paramagnetiche con immobilizzazione reversibile di fase solida (Solid Phase Reversible Immobilization, SPRI). CosMCPrep utilizza un singolo protocollo per purificare una varietà di modelli ad alto e a basso numero di copie, pur mantenendo la flessibilità per supportare la processazione manuale e automatizzata.

• Isolamento di plasmidi di alta qualità
• Un solo protocollo per la purificazione di tutti i tipi di modelli
• Le procedure di automazione producono una variabilità minima del rendimento e della qualità dei plasmidi 

 

Elevato recupero di DNA plasmidico di alta qualità di piccole dimensioni e di grandi dimensioni da E. coli e Pseudomonas Aeruginosa

Tipo di plasmide	Concentrazione (ng/µl)	Rendimento (µg)
Plasmide di piccole dimensioni (<10 kb) ad="" alto="" numero="" di="">	359,2	14,4
Plasmide di piccole dimensioni (<10 kb) ad="" alto="" numero="" di="" copie="" isolato="" da="">	120,0	4,8
Plasmide di grandi dimensioni (>100 kb) presente in modo naturale	90,3	3,6

Il DNA plasmidico è stato isolato utilizzando il kit CosMCPrep di due ceppi di E. coli; un ceppo portava un plasmide ad alto numero di copie di piccole dimensioni (<10 kb) e="" l’altro="" ceppo="" portava="" un="" plasmide="" naturale="" di="" grandi="" dimensioni="" (="">100 kb) e un plasmide di piccole dimensioni ad alto numero di copie da P. aeruginosa. La concentrazione e il rendimento del DNA plasmidico sono stati quantificati utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). La purezza del plasmide è stata valutata utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific).

Nella Figura 1 (a destra) i rapporti A260/280 e A260/230 per tutti i plasmidi sono soddisfacenti per le applicazioni a valle. *I rapporti accettabili per A260/280 sono 1,8 e 2,0 e per A260/230 sono 2,0-2.2, ma a causa della variabilità dei rapporti nucleotidici e delle concentrazioni di DNA, i rapporti possono essere maggiori (ThermoScientific T042-Bollettino tecnico).

 

Preparazione mini, midi o maxi con lo stesso kit

Volume notturno (ml)	Concentrazione media (ng/µl)	Rendimento medio (µg)	Media A260/A280	Media A260/A230
0,8	258	10,3	2,1	2,0
2	1893	74,0	2,2	2,8
5,5	2978	298,0	1,9	2,4

Un plasmide di piccole dimensioni (<10 kb)="" ad="" alto="" numero="" di="" copie="" è="" stato="" isolato="" da="" e.="" coli.="" tre="" volumi="" della="" stessa="" crescita="" notturna="" sono="" stati="" lisati="" e="" il="" plasmide="" è="" stato="" isolato="" utilizzando="" il="" kit="" cosmcprep.="" l’input="" più="" grande="" ha="" causato="" un="" aumento="" lineare="" della="" concentrazione="" di="" plasmidi.="">

Tipi di plasmidi compatibili:

• Plasmidi a basso numero di copie
• Plasmidi ad alto numero di copie
• BAC
• Cosmidi
• Fosmidi
• Plasmidi naturali di grandi dimensioni

 

CosMCPrep richiede un minore tempo di preparazione manuale

L’estrazione di DNA plasmidico con CosMCPrep richiede un tempo di preparazione manuale minore e meno passaggi di pipettamento rispetto all’estrazione con kit basati su colonne. La Figura 3 rappresenta il tempo totale di preparazione dei plasmidi di un campione per 1-96 campioni utilizzando CosMCPrep o un kit basato su colonne. Con 10 campioni, il tempo di preparazione manuale dei plasmidi è minore con CosMCPrep. Il numero totale di azioni di pipettamento (Figura 4), che includono la dispensazione in un campione, la miscelazione di un campione e lo smaltimento dei puntali, per 1, 8, 24, 48 e 96 campioni. Con la possibilità di utilizzare una pipetta multicanale, le azioni di pipettamento sono significativamente minori rispetto a quelle necessarie con kit basati su colonne.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Flusso di lavoro visivo

  

1. Pellet di cellule
2. Risospensione delle cellule in RE1
3. Cellule di lisi in soluzione L2
4. Aggiungere soluzione N3 per neutralizzare la lisi
5. Riduzione in pellet della lisi e trasferimento del surnatante
6. Legame del DNA plasmidico alle biglie magnetiche
7. Separazione delle biglie magnetiche dai contaminanti
8. Lavaggio delle biglie magnetiche con etanolo al 70% per la rimozione dei contaminanti
9. Ripetere il lavaggio 3 volte
10. Eluizione di plasmide dalle biglie magnetiche
11. Trasferimento a una nuova piastra

 

Prodotti CosMCPrep per la purificazione di plasmidi

CosMCPrep è disponibile in 2 dimensioni, in base alle esigenze di capacità produttiva. Fare clic sul codice (PN) specifico riportato di seguito per acquistare o richiedere un preventivo. Per ulteriori informazioni, consultare la pagina Purificazione del DNA plasmidico relativa a CosMCPrep.

CODICE #	NOME	PREPARAZIONI
A37064	CosMCPrep	384
A29174	CosMCPrep	4000

 

 

Senza indicazione o convalida per l’uso nella diagnosi delle malattie o di altre condizioni.
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