Il software CytExpert separa la compensazione del colore e gli esperimenti di acquisizione del campione in file separati designati, rispettivamente, .xitc e .xit. Lo sperimentatore può scegliere quale eseguire per primo.

Creazione di un nuovo esperimento (.xit)

1. Selezionare New Experiment (Nuovo esperimento) nel menu File, specificare il percorso del file e assegnare un nome all’esperimento o accettare il nome predefinito Exp_YYYMMDD-1, quindi selezionare Save (Salva).
2. Selezionare Set Channel (Imposta canale) nel menu Settings (Impostazioni). Selezionare i segnali del canale desiderato nella casella di controllo. Digitare il nome del reagente nella colonna dell’etichetta, se si desidera.
3. Esplorare i pulsanti della barra degli strumenti per creare diagrammi nell’area di lavoro dell’esperimento. Selezionare il nome dell’asse sul diagramma per modificare quale canale viene visualizzato.
4. Per creare i gate, utilizzare i pulsanti di controllo del gating sulla barra degli strumenti oppure fare clic con il pulsante destro del mouse sul diagramma e selezionare il tipo di gate richiesto.
5. Selezionare l’area di intestazione del diagramma per assegnare i gate ai diagrammi richiesti.
6. Selezionare il pulsante Population Hierarchy (Gerarchia della popolazione) dalla barra degli strumenti per visualizzare la gerarchia della popolazione. Si possono cambiare colore e nomi dei gate facendo doppio clic sul colore o nome nella finestra della gerarchia della popolazione.
7. Selezionare il pulsante Statistics (Dati statistici) dalla barra degli strumenti per visualizzare la finestra dei dati statistici. Fare clic con il pulsante destro del mouse sulla tabella Statistics, selezionare Statistics Setting (Impostazioni dei dati statistici) e scegliere l'intestazione, i dati statistici e le popolazioni di interesse desiderati.
8. Selezionare il pulsante Acq. Setting (Impostazione acquisizione) sul pannello al lato sinistro per aprire la finestra Acq. Setting e visualizzare i guadagni del citometro e le impostazioni di soglia. Nella scheda Gain (Guadagno), selezionare Recommended (Raccomandato) nei casi in cui non si specifichino le proprie impostazioni di guadagno di parametro predefinito.
9. Importare una matrice di compensazione per applicare i valori di compensazione all’esperimento, se necessario, selezionando Compensation Matrix (Matrice di compensazione) dal menu Settings per portare in primo piano la tabella della matrice di compensazione. Selezionare Import from Library (Importa dalla libreria) o Import (Importa) e individuare il file della matrice di compensazione (.comp) da importare. Selezionare l'opzione desiderata per importare la matrice di compensazione e le impostazioni di guadagno. Fare riferimento ad importazione ed esportazione di compensazione nel modulo di compensazione dell’IFU Cytoflex per maggiori informazioni.

Campionamento e prelievo di dati

1. Collocare la provetta del campione nel portaprovette e selezionare Run (Eseguire) per caricare il campione. Nel pannello Acquisition (Acquisizione), selezionare la portata di flusso del campione e il tipo nelle impostazioni di acquisizione desiderata per Eventi da visualizzare, Eventi da registrare e Ora da registrare.
2. Regolare le impostazioni di guadagno per i diversi canali nella scheda Gain della finestra Acq. Setting o utilizzare il pulsante Gain Control (Controllo del guadagno) sulla barra degli strumenti direttamente nel diagramma in cui i dati appaiono durante il prelievo di dati. Aumentando il guadagno si aumenta il segnale. Abbassando il guadagno si riduce il segnale.
   Nota: Ottimizzare le impostazioni di guadagno in base ai propri obiettivi sperimentali. Le impostazioni raccomandate sono solo per riferimento.
3. Regolare le impostazioni di soglia, se necessario, per rimuovere un inutile rumore del segnale selezionando la scheda Threshold (Soglia) nella finestra Acq. Setting. Scegliere il canale per impostare la soglia e immettere manualmente un valore nella scheda Threshold . In alternativa, selezionare il pulsante Threshold della barra degli strumenti e spostare il mouse nella posizione della soglia desiderata nel diagramma desiderato.
4. Selezionare Record (Registrare) per salvare i dati e attendere il termine del processo di salvataggio. Il supporto della provetta del campione torna alla posizione di caricamento. Aggiungere ulteriori provette all’elenco Tube (Provetta) se richiesto, caricare le provette e registrare i dati per ciascuna provetta fino a quando sono stati prelevati tutti i dati richiesti.

Identificare i dati statistici da esportare con l’esperimento

La tabella dei dati statistici può essere generata selezionando l’icona “Statistic” dalla scheda Wokspace (area di lavoro).

1. Una volta che si apre la tabella dei dati statistici, fare clic con il pulsante destro del mouse sulla tabella per accedere al menu.
2. Selezionare Statistics Settings (Impostazioni dei dati statistici) e qui scegliere i dati statistici, la popolazione e l’intestazione che si desidera visualizzare.
3. Selezionare Apply to All Tubes (Applicare a tutte le provette) in fondo alla finestra Statistic Setting se si vogliono applicare a tutti i campioni. Selezionare OK una volta fatto.
4. Se si desidera esportare i dati statistici a una tabella csv, fare clic con il pulsante destro del mouse sulla tabella e selezionare Export All Samples to CSV File (Esporta tutti i campioni a un file CSV. Scegliere la directory e salvare il file.
5. È possibile aprire questo file in formato Excel e anche salvarlo come file.xls.

Analisi dei dati

1. Aprire un esperimento esistente (.xit)
   Menu File > Selezionare FCS File, Open (Aprire). I file importati ora hanno un cerchio verde.
2. Scegliere l'icona dell’analisi sul lato sinistro dello schermo
3. Utilizzare gli strumenti per gestire i diagrammi come richiesto per completare l'analisi. Diagrammi multi-data o di sovrapposizione (menu a discesa). Selezionare lo strumento del diamante per riempire le sovrapposizioni o trascinare e rilasciare i file.

Per Istruzioni per l'uso più dettagliate, fare riferimento al manuale di istruzioni per l’utente per l'analisi dei dati.