GenFind V3 Performance and Data
Isolamento del DNA genomico da sangue e siero
Il kit GenFind V3 è un kit reagenti di isolamento del DNA genomico (gDNA) basato sulla tecnologia a biglie paramagnetiche SPRI. Consente la purificazione del gDNA compatibile con PCR da sangue fresco e congelato raccolto in provette contenenti anticoagulanti come EDTA, citrato o eparina. Il metodo può essere eseguito manualmente nel formato di una provetta da 2 ml o nel formato da 96 pozzetti o automatizzato nel formato da 96 pozzetti su diverse workstation per la gestione dei liquidi Beckman Coulter Biomek. Recupero costante del gDNA da vari tipi di campioni di sangue fresco e congelato rispetto ad altri fornitori.
- Purezza e qualità ottimali e uniformi degli isolati di gDNA
- Nessun carryover di inibitori da vari anticoagulanti per PCR e altri analisi a valle eccezionali
- Processa fino a 400 µl di sangue fresco o congelato
Recupero e purezza del gDNA competitivi
Il DNA genomico è stato estratto da 200 μl di sangue fresco o congelato raccolto in provette contenenti eparina, EDTA o citrato con GenFind V3 e kit di altri fornitori. Nella Figura 1 i campioni sono stati quantificati con il kit di analisi del DNA Quant-iT, con Picogreen e con NanoDrop (Thermo Fisher Scientific) per il rendimento del DNA. Le quantità maggiori di gDNA sono state recuperate con il kit GenFind V3 rispetto ai kit di altri fornitori in un solo tipo di provetta per la raccolta del sangue e sono stati recuperati i rendimenti competitivi dagli altri due tipi di provette. Nella Figura 2 i campioni sono stati valutati per la purezza utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Per tutti i tipi di campioni di sangue freschi e congelati, GenFind V3 ha purificato il gDNA con rapporti A260/280 soddisfacenti.
Purezza del gDNA migliorata con GenFind V3
Il DNA genomico è stato estratto da 200 μl di sangue fresco o congelato raccolto in provette contenenti eparina, EDTA e citrato con GenFind V3, GenFind V2 e tre kit di altri fornitori. I campioni sono stati valutati per la purezza utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Per ogni tipo di provetta, GenFind V3 ha estratto il gDNA con maggiore purezza rispetto a GenFind V2 e ai kit di altri fornitori.Aumento del rendimento con aumento del volume di input del sangue
L’aumento del volume dell’input può aumentare i rendimenti totali senza compromettere la purezza. Il DNA genomico è stato estratto da 400 μl di sangue fresco raccolto in provette contenenti EDTA con GenFind V3. I campioni sono stati valutati per la purezza e il rendimento utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific).
Nessun carryover di inibitori per applicazioni PCR e a valle eccezionali
La capacità per PCR è stata valutata tramite qPCR, mediante un set di primer (forward primer 5´-ggacttcgagcaagagatgg-3´ e reverse primer 5´-agcactgtgttggcgtacag-3´) progettato per estendere gli esoni 4 e 5 del gene beta (β)-actina (ActB) per produrre 327 ampliconi di coppie di basi. Figura 6: il grafico di amplificazione di 10ng di DNA estratto da provette contenenti citrato, EDTA o eparina. Per tutti i tipi di provette si ottiene l'amplificazione del DNA che indica l’assenza di carryover di inibitori della PCR in ciascun anticoagulante. Figura 7: il grafico di amplificazione di 10ng di DNA estratto da provette congelate contenenti citrato utilizzando GenFind V3 e GenFind V2.
Elevato recupero del DNA ad alto peso molecolare
GenFind V3 isola il gDNA di alta qualità. Il DNA genomico isolato da vari campioni di sangue raccolto in provette di eparina, EDTA e citrato è stato analizzato su Agilent Genomic DNA ScreenTape per valutare la qualità. Nell'immagine a destra, i valori DIN di tutti i campioni isolati con GenFind V3 sono risultati ≥ 9,0, il che indica che sono stati recuperati campioni di gDNA intatti e di alta qualità. Il DNA isolato utilizzando il kit del fornitore A sono risultati di qualità inferiore, come indicato dal punteggio DIN di 7,8. Nella Figura 9 e nella Figura 10 sono illustrate tracce di campioni del DNA genomico isolato da provette contenenti eparina e citrato.
Flusso di lavoro visivo
1. Sangue intero lisato o siero in tampone di lisi e proteinasi K
2. Legame del DNA alle biglie magnetiche
3. Separazione delle biglie dai contaminanti
4. Lavaggio delle biglie magnetiche con tampone di lavaggio 1 per la rimozione dei contaminanti
5. Lavaggio delle biglie magnetiche con tampone di lavaggio 2 per la rimozione dei contaminanti
6. Eluizione del DNA dalle biglie magnetiche
7. Trasferimento nella nuova piastra per la conservazione
Minore tempo di preparazione manuale con meno azioni di pipettamento
La Figura 11 rappresenta il tempo di preparazione manuale per estrarre il gDNA per 1-96 campioni utilizzando GenFind V3 o un fornitore basato su colonne. Anche con 10 campioni, il tempo di preparazione manuale per estrarre il DNA dal sangue è inferiore con GenFind V3. Figura 12: il numero totale delle azioni di pipettamento necessarie per 1, 8, 24, 48 e 96 campioni. Le azioni di pipettamento includono la dispensazione del campione, la miscelazione del campione e l’eliminazione del surnatante. Con la possibilità di utilizzare una pipetta multicanale, le azioni di pipettamento necessarie con 24 o più campioni sono inferiori rispetto a quelle necessarie con fornitori basati su colonne.
Prodotti per l’isolamento del DNA da sangue
Il kit reagenti GenFind V3 è disponibile in 2 dimensioni, in base alle esigenze di capacità produttiva. Contattare il rappresentante di vendita locale o visitare la nostra pagina dei prodotti per richiedere un preventivo.
CODICE # | NOME | PREPARAZIONI |
---|---|---|
C34880 | GenFind V3 | 50 |
C34881 | GenFind V3 | 384 |
Senza indicazione o convalida per l’uso nella diagnosi delle malattie o di altre condizioni.
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