Isolamento del DNA genomico dai campioni di tessuto

Il kit DNAdvance è un kit reagenti per l’isolamento del DNA genomico (gDNA) basato sulla tecnologia a sfere paramagnetiche SPRI. Consente la purificazione di DNA di alta qualità da campioni di tessuto. Il kit DNAdvance offre un maggiore recupero di gDNA di alta qualità rispetto agli altri kit di estrazione del DNA disponibili in commercio. L’estrazione può essere eseguita manualmente nel formato di una provetta da 2 ml o nel formato da 96 pozzetti o automatizzata nel formato da 96 pozzetti su diverse workstation genomiche per la gestione dei liquidi Beckman Coulter Biomek.

• Compatibile con applicazioni a valle basate su PCR
• Oltre 3 volte il rendimento delle analisi chimiche di estrazione degli altri fornitori
• Flussi di lavoro manuali e automatizzati disponibili

Maggiore recupero di gDNA di alta qualità

Il DNA genomico è stato estratto da 20 mg di tessuto epatico usando DNAdvance e kit di altri fornitori. [Figura 1] I campioni sono stati quantificati utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Il kit DNAdvance ha recuperato quantità superiori di gDNA rispetto ai kit degli altri fornitori. [Figura 2] I campioni sono stati valutati per la purezza utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Le barre di errore rappresentano la deviazione standard di tre replicati tecnici.

gDNA ad alto peso molecolare di alta qualità

DNAdvance isola il gDNA di alta qualità. Il DNA genomico isolato da 4 diversi tipi di tessuto utilizzando DNAdvance è stato analizzato con Agilent Genomic DNA ScreenTape per valutare la qualità. I valori DIN di campioni isolati utilizzando DNAdvance erano di alta qualità per tutti i tipi di tessuto. Tracce di DNA estratto da coda (Figura 4) e rene (Figura 5) nell’elettrografo del campione.

Nessun carryover di contaminanti per l’inibizione dell’amplificazione di PCR o delle applicazioni a valle

Figura 6: La capacità di amplificazione del DNA è stata valutata tramite qPCR mediante un set di primer (forward primer 5´-ggacttcgagcaagagatgg-3´ e reverse primer 5´-agcactgtgttggcgtacag-3´) progettato per estendere gli esoni 4 e 5 del gene beta (β)-actina (ActB) per produrre 327 ampliconi di coppie di basi. Il gDNA isolato da 4 tipi di tessuto con il kit DNAdvance era amplificabile, indicando che il kit ha rimosso gli inibitori della PCR.

Estrazioni di DNA da diversi tipi di tessuto

Il rendimento gDNA ottenuto da cinque diversi tipi di tessuto. Il rendimento è stato quantificato utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). La purezza dei campioni è stata valutata usando il NanoDrop (Thermo Fisher Scientific); i rapporti A260/280 sono visibili nelle ultime due colonne e sono soddisfacenti per applicazioni a valle.

Flusso di lavoro visivo

1. Tessuto di lisi in tampone di lisi e proteinasi K
2. Legame del DNA alle biglie magnetiche
3. Separazione delle biglie magnetiche dai contaminanti
4. Lavaggio delle biglie magnetiche con etanolo al 70% per la rimozione dei contaminanti
5. Ripetere la fase di lavaggio 3 volte
6. Eluizione del DNA dalle biglie magnetiche
7. Trasferimento a una nuova piastra

Estrazione di DNA da campioni in meno tempo con meno movimenti della pipetta

Tempistica del metodo automatizzato e manuale

Tempo di preparazione manuale stimato e tempo totale, in ore, richiesto per eseguire estrazioni di DNA con DNAdvance. Il tempo stimato non prende in considerazione la fase di lisi notturna. L’analisi chimica può essere eseguita manualmente o automaticamente su una workstation Biomek. La tabella rappresenta i tempi automatizzati eseguiti su una workstation Biomek i-Series multicanale con una testa da 1.200 µl. È indicata la differenza di tempo tra manuale e automazione (NR = non raccomandato).

Prodotti DNAdvance per l’isolamento del DNA dal tessuto

Il kit reagenti DNAdvance è disponibile in 2 dimensioni, in base alle esigenze di capacità produttiva. Fare clic sul codice (PN) specifico riportato di seguito per acquistare o richiedere un preventivo. Per ulteriori informazioni, consultare la pagina Isolamento del DNA dal tessuto relativa a DNAdvance.