Tutti i coloranti Fixable Viabilty disponibili sono basati su gruppi funzionali attivati dall’estere NHS che si reticolano con le ammine primarie sulle proteine.  L’idrolisi compete con la reazione di reticolazione e riduce l’efficienza della reazione di marcatura.  Questa reazione di idrolisi dipende dal pH e dalla temperatura.  L’emivita del gruppo reattivo può essere di soli 10 minuti a pH 8,6 a 4 °C.  Ciò significa che nelle soluzioni acquose, il colorante è reso inerte per un breve periodo di tempo, riducendo la colorazione.

Inoltre, il vapore acqueo nella soluzione stock può compromettere le prestazioni del reagente, riducendo la colorazione.  Quando la colorazione si riduce più cellule sembrano essere vive quando in realtà sono morte. Per questo motivo, i reagenti sono tipicamente ricostituiti in DMSO, conservati a -80 °C, e aliquotati in piccoli volumi per uso singolo.  Le procedure di colorazione devono essere attentamente programmate per ottenere risultati coerenti.

I coloranti ViaKrome Fixable Viablity non utilizzano gruppi reattivi estere NHS.  I prodotti chimici non sono soggetti a idrolisi, portando a prestazioni più robuste nelle procedure di analisi standard.

Risultati dell’analisi 2 e 24 ore dopo la colorazione. Una miscela di cellule Jurkat e cellule Jurkat sottoposte a stress termico (55 °C per 10 minuti) sono state colorate con il colorante ViaKrome Fixable Viability.  I campioni sono stati acquisiti immediatamente e a 2 ore (n = 4) o 24 ore (n = 3) dopo la colorazione.  La popolazione di cellule morte è rappresentata come percentuale del tempo zero.  Le barre di errore rappresentano la variazione media tra le repliche.  Il reclutamento a 2 ore è del 98-100% del tempo 0 e il reclutamento a 24 ore è del 91-103% del tempo 0.