Prestazioni robuste
Un obiettivo chiave dell’aggiunta di un colorante vitale al progetto del pannello è di consentire la discriminazione delle cellule morte dai gate successivi. Le cellule morte si legano in modo non specifico agli anticorpi il che può alterare l’analisi della popolazione. Se il reagente perde efficacia la colorazione si riduce portando a un maggior numero di cellule morte che sembrano essere vive. Oppure, se la colorazione è aumentata in modo aberrante, più cellule appariranno morte. Sono necessari reagenti stabili coerenti per prestazioni di un’analisi robusta.
Beckman Coulter caratterizza completamente la qualità dei nostri reagenti. Lotti multipli di ciascun reagente sono testati da più operatori per determinare la concentrazione di colorazione e il tempo di incubazione raccomandati. Ciascun nuovo lotto è valutato per garantire che i parametri QC stabiliti siano soddisfatti.
| ViaKrome 405 | ViaKrome 561 | ViaKrome 638 | ViaKrome 808 | |
|---|---|---|---|---|
| Prova 1 | 19,6 | 19,8 | 21,2 | 15,5 |
| Prova 2 | 19,3 | 23,9 | 21,8 | 17,9 |
| Prova 3 | 21,0 | 20,6 | 22,9 | 17,0 |
| Prova 4 | 17,4 | 24,0 | 17,8 | 16,3 |
| % media di cellule morte | 19,3 | 22,1 | 20,9 | 16,7 |
| SD | 1,5 | 2,2 | 2,2 | 1,0 |
| CV% | 7,6% | 9,9% | 10,6% | 5,9% |
Precisione dell’analisi. Una miscela di cellule Jurkat e cellule Jurkat sottoposte a stress termico (55 °C per 10 minuti) è stata colorata con il colorante ViaKrome Fixable Viability. I campioni sono stati acquisiti immediatamente dopo la colorazione (n=4). La popolazione di cellule morte è indicata in percentuale ed è indicata l’analisi statistica della variazione. L’analisi CV variava da 5,9 a 10,6%.
Stabilità a 18-25 °C del colorante ViaKrome 405 Fixable Viability
Stabilità a 18-25 °C del colorante ViaKrome 561 Fixable Viability
Stabilità a 18-25 °C del colorante ViaKrome 638 Fixable Viability
Stabilità a 18-25 °C del colorante ViaKrome 808 Fixable Viability
Stabilità della soluzione stock. Il colorante ViaKrome Fixable Viability indicato è stato ricostituito in PBS e utilizzato immediatamente (0 ore) o conservato presso 18-25 °C per il tempo indicato, fino a un massimo di 4 giorni (96 ore) al riparo dalla luce. Una miscela di cellule Jurkat e cellule Jurkat sottoposte a stress termico (55 °C per 10 minuti) è stata colorata e i dati sono stati acquisiti sul citometro a flusso CytoFLEX LX. Il grafico mostra la percentuale di cellule morte (barre) e il rapporto segnale/rumore (linea) per ciascun punto temporale. Entrambe le misure rimangono coerenti durante il periodo esaminato.
