Le cellule morte si legano in modo non specifico agli anticorpi, alterando i calcoli percentuale positivi. Le cellule morte aumentano anche nell’autofluorescenza che interferisce con il rilevamento di segnali specifici.  L’esclusione delle cellule morte deve essere completata prima dell’analisi della popolazione mediante gating sequenziale.

Confronto delle analisi dei campioni senza e con esclusione delle cellule morte. Le PBMC congelate sono state termicamente stressate (55 °C per 10 minuti) prima della colorazione immunocolorante senza (A) o con (B) l’aggiunta del colorante ViaKrome 405 Fixable Viability. Le cellule sono state quindi processate con kit per la preparazione della colorazione cellulare Perfix-nc (numero di parte B10825) e colorate con Granzyme B-FITC, CD19-PE, CD14-ECD, CD79a-PC5.5, CD3-PC7 e CD45 arancio krome. I dati sono stati acquisiti utilizzando il citometro a flusso CytoFLEX LX N-V-B-Y-R-I series e analizzati con il software di analisi Kaluza.  Le statistiche di gate mostrano la percentuale della popolazione madre e differiscono nelle due condizioni che mostrano l’effetto dell’eliminazione delle cellule morte prima del gating sequenziale.